Роль метода мультиплексной проба-зависимой лигазной реакции в диагностике гемофилии А: анализ крупных структурных перестроек гена F8

Молекулярной основой гемофилии А являются аллельные варианты гена F8, среди которых крупные делеции и дупликации составляют примерно 6% случаев тяжёлой и 1,4% — лёгкой/средней форм заболевания. Современные подходы к молекулярной-генетической диагностике гемофилии А предусматривают, прежде всего, выявление инверсий интронов 22 и 1, а также секвенирование кодирующих регионов и прилегающих к ним сплайс-сайтов гена F8. Однако эти методы не всегда позволяют точно установить генетическую причину заболевания, особенно когда она обусловлена крупными структурными перестройками — делециями и дупликациями. Настоящее исследование впервые в Республике Беларусь оценивает эффективность метода мультиплексной проба-зависимой лигазной реакции (MLPA) в выявлении крупных структурных нарушений гена F8. В исследование включены 6 пациентов мужского пола с гемофилией А из 5 неродственных семей и 3 женщины — их кровные родственницы (матери или сёстры), обследованные для определения статуса носительства и характера наследования. В результате проведённого исследования у всех пациентов методом MLPA выявлены крупные структурные нарушения гена F8 в гемизиготном состоянии: делеции экзона 6 и экзонов 2–6, а также дупликации экзона 13 и экзонов 2–7. У родственниц пациентов выявлены те же структурные нарушения в гетерозиготном состоянии. Полученные результаты подтверждают высокую чувствительность и клиническую значимость метода MLPA для генетической диагностики гемофилии А. Метод MLPA создаёт основу для точного медико-генетического консультирования семей с отягощённым анамнезом, прогнозирования риска передачи заболевания в последующих поколениях и профилактики осложнений проводимой терапии.

1. The vaginal microbiota, human papillomavirus infection and cervical intraepithelial neoplasia: what do we know and where are we going next? / A. Mitra, D. A. MacIntyre, J. R. Marchesi [et al.] // Microbiome. – 2016. – Vol. 4, No. 1. – P. 58. – DOI: 10.1186/s40168-016-0203-0.

2. Disturbances of vaginal microbiome composition in human papillomavirus infection and cervical carcinogenesis: a qualitative systematic review / M. Wu, H. Li, H. Yu [et al.] // Front Oncol. – 2022. – Vol. 12. – P. 941741. – DOI: 10.3389/fonc.2022.941741.

3. Vaginal dysbiosis and the risk of human papillomavirus and cervical cancer: systematic review and meta-analysis / N. Brusselaers, S. Shrestha, J. van de Wijgert [et al.] // Am J Obstet Gynecol. – 2019. – Vol. 221, No. 1. – P. 9–18. – DOI: 10.1016/j.ajog.2018.12.011.

4. Role of Lactobacillus in cervical cancer / X. Yang, M. Da, W. Zhang [et al.] // Cancer Manag Res. – 2018. – Vol. 10. – P. 1219–1229. – DOI: 10.2147/CMAR.S165228.

5. Selection of new lactic acid bacteria strains bearing probiotic features from mucosal microbiota of healthy calves: looking for immunobiotics through in vitro and in vivo approaches for immunoprophylaxis applications / S. Sandes, L. Alvim, B. Silva [et al.] // Microbiol Res. – 2017. – Vol. 200. – P. 1–13. – DOI: 10.1016/j.micres.2017.03.008.

6. VALENCIA: a nearest centroid classification method for vaginal microbial communities based on composition / M. T. France, B. Ma, P. Gajer [et al.] // Microbiome. – 2020. – Vol. 8, No. 1. – P. 166. – DOI: 10.1186/s40168-020-00934-6.

7. Towards a deeper understanding of the vaginal microbiota / M. France, M. Alizadeh, S. Brown [et al.] // Nat Microbiol. – 2022. – Vol. 7, No. 3. – P. 367–378. – DOI: 10.1038/s41564-022-01083-2.

8. Chee, W. J. Y. Vaginal microbiota and the potential of Lactobacillus derivatives in maintaining vaginal health / W. J. Y. Chee, S. Y. Chew, L. T. L. Than // Microb Cell Fact. – 2020. – Vol. 19, No. 1. – P. 203. – DOI: 10.1186/s12934-020-01464-4.

9. The vaginal microbiota associates with the regression of untreated cervical intraepithelial neoplasia 2 lesions / A. Mitra, D. A. MacIntyre, G. Ntritsos [et al.] // Nat Commun. – 2020. – Vol. 11, No. 1. – P. 1999. – DOI: 10.1038/s41467-020-15856-y.

10. Changes of vaginal microbiota during cervical carcinogenesis in women with human papillomavirus infection / K. A. So, E. J. Yang, N. R. Kim [et al.] // PLoS One. – 2020. – Vol. 15, No. 9. – Article e0238705. – DOI: 10.1371/journal.pone.0238705.

11. A meta-analysis of the relationship between vaginal microecology, human papillomavirus infection and cervical intraepithelial neoplasia / Y. Liang, M. Chen, L. Qin [et al.] // Infect Agent Cancer. – 2019. – Vol. 14. – P. 29. – DOI: 10.1186/s13027-019-0243-8.

12. Multiplex quantitative polymerase chain reaction assay for the identification and quantitation of major vaginal lactobacilli / S. V. Balashov, E. Mordechai, M. E. Adelson [et al.] // Diagn Microbiol Infect Dis. – 2014. – Vol. 78, No. 4. – P. 321–327. – DOI: 10.1016/j.diagmicrobio.2013.08.004.

13. R Core Team. R: a language and environment for statistical computing / R Core Team. – Vienna : R Foundation for Statistical Computing, 2024. – URL: https://www.R-project.org (дата обращения: 05.05.2026).

14. Conway, J. R. UpSetR: an R package for the visualization of intersecting sets and their properties / J. R. Conway, A. Lex, N. Gehlenborg // Bioinformatics. – 2017. – Vol. 33, No. 18. – P. 2938–2940. – DOI: 10.1093/bioinformatics/btx364.

15. Changes in microbial composition and interaction patterns of female urogenital tract and rectum in response to HPV infection / Y. H. Dong, Y. H. Luo, C. J. Liu [et al.] // J Transl Med. – 2024. – Vol. 22, No. 1. – P. 125. – DOI: 10.1186/s12967-024-04916-2.

16. Ворошилина, Е. С. Нормальное состояние микробиоценоза влагалища: оценка с субъективной, экспертной и лабораторной точек зрения / Е. С. Ворошилина, Д. Л. Зорников, Е. Э. Плотко // Вестник Российского государственного медицинского университета. – 2017. – № 2. – С. 42–47.

17. Мелкумян, А. Р. Влагалищные лактобактерии – современные подходы к видовой идентификации и изучению их роли в микробном сообществе / А. Р. Мелкумян, Т. В. Припутневич // Акушерство и гинекология. – 2013. – № 7. – С. 18–23.

18. Cervicovaginal microbiome factors in clearance of human papillomavirus infection / W. Dai, H. Du, S. Li [et al.] // Front Oncol. – 2021. – Vol. 11. – P. 722639. – DOI: 10.3389/fonc.2021.722639.

19. Amabebe, E. The vaginal microenvironment: the physiologic role of Lactobacilli / E. Amabebe, D. O. C. Anumba // Front Med (Lausanne). – 2018. – Vol. 5. – P. 181. – DOI: 10.3389/fmed.2018.00181.

20. Lactobacillus iners: friend or foe? / M. I. Petrova, G. Reid, M. Vaneechoutte [et al.] // Trends Microbiol. – 2017. – Vol. 25, No. 3. – P. 182–191. – DOI: 10.1016/j.tim.2016.11.007.

21. Микробиота влагалища и ВПЧ-ассоциированные заболевания шейки матки: установленная взаимосвязь / Н. М. Назарова, А. С. Акопян, Т. В. Припутневич // Медицинский совет. – 2025. – Т. 19, № 4. – С. 20–28. – DOI: 10.21518/ms2025-084.