medbioМедико-биологические проблемы жизнедеятельностиMedical and Biological Problems of Life Activity2074-2088Республиканский научно-практический центр радиационной медицины и экологии человека10.58708/2074-2088.2026-2(38)-67-73medbio-516Research ArticleКЛИНИЧЕСКАЯ МЕДИЦИНАCLINICAL MEDICINEРоль метода мультиплексной проба-зависимой лигазной реакции в диагностике гемофилии А: анализ крупных структурных перестроек гена F8Role of multiplex ligation-dependent probe amplification in hemophilia A: analysis of large F8 variantshttps://orcid.org/0000-0002-6127-7404ЛюбушкинА. В.LiubushkinA. V.

г. Минск

sasha36601@yandex.byhttps://orcid.org/0000-0003-0233-7718ДмитриевЕ. В.DmitrievE. V.

г. Минск

jenyadmitriev24@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0002-0706-6622ПоляковаЕ. А.PolyakovaE. A.

г. Минск

polyakovakat86@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0003-1054-0054ВолковаЛ. И.VolkovaL. I.

г. Минск

luidmila_volkova@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-9696-3949ГурьяноваИ. Е.GuryanovaI. E.

г. Минск

guryanovairina1985@gmail.comГУ «РНПЦ детской онкологии, гематологии и иммунологии»; УО «Белорусский государственный медицинский университет»BelarusГУ «РНПЦ детской онкологии, гематологии и иммунологии»BelarusУО «Белорусский государственный медицинский университет»Belarus202607082026026773Copyright © Любушкин А.В., Дмитриев Е.В., Полякова Е.А., Волкова Л.И., Гурьянова И.Е., 20262026Любушкин А.В., Дмитриев Е.В., Полякова Е.А., Волкова Л.И., Гурьянова И.Е.Liubushkin A.V., Dmitriev E.V., Polyakova E.A., Volkova L.I., Guryanova I.E.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://medbio.ejournal.by/jour/article/view/516

Молекулярной основой гемофилии А являются аллельные варианты гена F8, среди которых крупные делеции и дупликации составляют примерно 6% случаев тяжёлой и 1,4% — лёгкой/средней форм заболевания. Современные подходы к молекулярной-генетической диагностике гемофилии А предусматривают, прежде всего, выявление инверсий интронов 22 и 1, а также секвенирование кодирующих регионов и прилегающих к ним сплайс-сайтов гена F8. Однако эти методы не всегда позволяют точно установить генетическую причину заболевания, особенно когда она обусловлена крупными структурными перестройками — делециями и дупликациями. Настоящее исследование впервые в Республике Беларусь оценивает эффективность метода мультиплексной проба-зависимой лигазной реакции (MLPA) в выявлении крупных структурных нарушений гена F8. В исследование включены 6 пациентов мужского пола с гемофилией А из 5 неродственных семей и 3 женщины — их кровные родственницы (матери или сёстры), обследованные для определения статуса носительства и характера наследования. В результате проведённого исследования у всех пациентов методом MLPA выявлены крупные структурные нарушения гена F8 в гемизиготном состоянии: делеции экзона 6 и экзонов 2–6, а также дупликации экзона 13 и экзонов 2–7. У родственниц пациентов выявлены те же структурные нарушения в гетерозиготном состоянии. Полученные результаты подтверждают высокую чувствительность и клиническую значимость метода MLPA для генетической диагностики гемофилии А. Метод MLPA создаёт основу для точного медико-генетического консультирования семей с отягощённым анамнезом, прогнозирования риска передачи заболевания в последующих поколениях и профилактики осложнений проводимой терапии.

Hemophilia A is caused by pathogenic variants in the F8 gene, with large deletions and duplications accounting for approximately 6% of severe cases and 1,4% of mild/moderate forms. Standard molecular diagnostic approaches typically include screening for introns 22 and 1 inversions, followed by sequencing of coding exons and flanking splice sites of the F8 gene. However, these methods frequently fail to detect large structural rearrangements, such as deletions and duplications, as the underlying genetic cause. This study is the first in Belarus to assess the utility of multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) for identifying large structural alterations in the F8 gene. The study included 6 male patients with hemophilia A from 5 unrelated families and 3 female blood relatives (mothers or sisters), assessed for carrier status and mode of inheritance. MLPA identified hemizygous large CNV in all patients: deletions of exon 6 and exons 2–6, and duplications of exon 13 and exons 2–7. The same structural alterations were detected in heterozygous state in the female relatives examined. These findings demonstrate the high sensitivity and clinical value of MLPA in the genetic diagnosis of hemophilia A. The method provides a robust foundation for precise medical genetic counseling in families with a positive history, accurate risk assessment for disease transmission, and prevention of therapy-related complications.

гемофилия Аген F8генетические нарушениямолекулярно-генетическая диагностикаMLPA-анализкрупные делеции и дупликацииhemophilia AF8 genegenetic variantsgenetic diagnosisMLPA analysislarge deletions and duplicationsReferencesThe vaginal microbiota, human papillomavirus infection and cervical intraepithelial neoplasia: what do we know and where are we going next? / A. Mitra, D. A. MacIntyre, J. R. Marchesi [et al.] // Microbiome. – 2016. – Vol. 4, No. 1. – P. 58. – DOI: 10.1186/s40168-016-0203-0.The vaginal microbiota, human papillomavirus infection and cervical intraepithelial neoplasia: what do we know and where are we going next? / A. Mitra, D. A. MacIntyre, J. R. Marchesi [et al.] // Microbiome. – 2016. – Vol. 4, No. 1. – P. 58. – DOI: 10.1186/s40168-016-0203-0.Disturbances of vaginal microbiome composition in human papillomavirus infection and cervical carcinogenesis: a qualitative systematic review / M. Wu, H. Li, H. Yu [et al.] // Front Oncol. – 2022. – Vol. 12. – P. 941741. – DOI: 10.3389/fonc.2022.941741.Disturbances of vaginal microbiome composition in human papillomavirus infection and cervical carcinogenesis: a qualitative systematic review / M. Wu, H. Li, H. Yu [et al.] // Front Oncol. – 2022. – Vol. 12. – P. 941741. – DOI: 10.3389/fonc.2022.941741.Vaginal dysbiosis and the risk of human papillomavirus and cervical cancer: systematic review and meta-analysis / N. Brusselaers, S. Shrestha, J. van de Wijgert [et al.] // Am J Obstet Gynecol. – 2019. – Vol. 221, No. 1. – P. 9–18. – DOI: 10.1016/j.ajog.2018.12.011.Vaginal dysbiosis and the risk of human papillomavirus and cervical cancer: systematic review and meta-analysis / N. Brusselaers, S. Shrestha, J. van de Wijgert [et al.] // Am J Obstet Gynecol. – 2019. – Vol. 221, No. 1. – P. 9–18. – DOI: 10.1016/j.ajog.2018.12.011.Role of Lactobacillus in cervical cancer / X. Yang, M. Da, W. Zhang [et al.] // Cancer Manag Res. – 2018. – Vol. 10. – P. 1219–1229. – DOI: 10.2147/CMAR.S165228.Role of Lactobacillus in cervical cancer / X. Yang, M. Da, W. Zhang [et al.] // Cancer Manag Res. – 2018. – Vol. 10. – P. 1219–1229. – DOI: 10.2147/CMAR.S165228.Selection of new lactic acid bacteria strains bearing probiotic features from mucosal microbiota of healthy calves: looking for immunobiotics through in vitro and in vivo approaches for immunoprophylaxis applications / S. Sandes, L. Alvim, B. Silva [et al.] // Microbiol Res. – 2017. – Vol. 200. – P. 1–13. – DOI: 10.1016/j.micres.2017.03.008.Selection of new lactic acid bacteria strains bearing probiotic features from mucosal microbiota of healthy calves: looking for immunobiotics through in vitro and in vivo approaches for immunoprophylaxis applications / S. Sandes, L. Alvim, B. Silva [et al.] // Microbiol Res. – 2017. – Vol. 200. – P. 1–13. – DOI: 10.1016/j.micres.2017.03.008.VALENCIA: a nearest centroid classification method for vaginal microbial communities based on composition / M. T. France, B. Ma, P. Gajer [et al.] // Microbiome. – 2020. – Vol. 8, No. 1. – P. 166. – DOI: 10.1186/s40168-020-00934-6.VALENCIA: a nearest centroid classification method for vaginal microbial communities based on composition / M. T. France, B. Ma, P. Gajer [et al.] // Microbiome. – 2020. – Vol. 8, No. 1. – P. 166. – DOI: 10.1186/s40168-020-00934-6.Towards a deeper understanding of the vaginal microbiota / M. France, M. Alizadeh, S. Brown [et al.] // Nat Microbiol. – 2022. – Vol. 7, No. 3. – P. 367–378. – DOI: 10.1038/s41564-022-01083-2.Towards a deeper understanding of the vaginal microbiota / M. France, M. Alizadeh, S. Brown [et al.] // Nat Microbiol. – 2022. – Vol. 7, No. 3. – P. 367–378. – DOI: 10.1038/s41564-022-01083-2.Chee, W. J. Y. Vaginal microbiota and the potential of Lactobacillus derivatives in maintaining vaginal health / W. J. Y. Chee, S. Y. Chew, L. T. L. Than // Microb Cell Fact. – 2020. – Vol. 19, No. 1. – P. 203. – DOI: 10.1186/s12934-020-01464-4.Chee, W. J. Y. Vaginal microbiota and the potential of Lactobacillus derivatives in maintaining vaginal health / W. J. Y. Chee, S. Y. Chew, L. T. L. Than // Microb Cell Fact. – 2020. – Vol. 19, No. 1. – P. 203. – DOI: 10.1186/s12934-020-01464-4.The vaginal microbiota associates with the regression of untreated cervical intraepithelial neoplasia 2 lesions / A. Mitra, D. A. MacIntyre, G. Ntritsos [et al.] // Nat Commun. – 2020. – Vol. 11, No. 1. – P. 1999. – DOI: 10.1038/s41467-020-15856-y.The vaginal microbiota associates with the regression of untreated cervical intraepithelial neoplasia 2 lesions / A. Mitra, D. A. MacIntyre, G. Ntritsos [et al.] // Nat Commun. – 2020. – Vol. 11, No. 1. – P. 1999. – DOI: 10.1038/s41467-020-15856-y.Changes of vaginal microbiota during cervical carcinogenesis in women with human papillomavirus infection / K. A. So, E. J. Yang, N. R. Kim [et al.] // PLoS One. – 2020. – Vol. 15, No. 9. – Article e0238705. – DOI: 10.1371/journal.pone.0238705.Changes of vaginal microbiota during cervical carcinogenesis in women with human papillomavirus infection / K. A. So, E. J. Yang, N. R. Kim [et al.] // PLoS One. – 2020. – Vol. 15, No. 9. – Article e0238705. – DOI: 10.1371/journal.pone.0238705.A meta-analysis of the relationship between vaginal microecology, human papillomavirus infection and cervical intraepithelial neoplasia / Y. Liang, M. Chen, L. Qin [et al.] // Infect Agent Cancer. – 2019. – Vol. 14. – P. 29. – DOI: 10.1186/s13027-019-0243-8.A meta-analysis of the relationship between vaginal microecology, human papillomavirus infection and cervical intraepithelial neoplasia / Y. Liang, M. Chen, L. Qin [et al.] // Infect Agent Cancer. – 2019. – Vol. 14. – P. 29. – DOI: 10.1186/s13027-019-0243-8.Multiplex quantitative polymerase chain reaction assay for the identification and quantitation of major vaginal lactobacilli / S. V. Balashov, E. Mordechai, M. E. Adelson [et al.] // Diagn Microbiol Infect Dis. – 2014. – Vol. 78, No. 4. – P. 321–327. – DOI: 10.1016/j.diagmicrobio.2013.08.004.Multiplex quantitative polymerase chain reaction assay for the identification and quantitation of major vaginal lactobacilli / S. V. Balashov, E. Mordechai, M. E. Adelson [et al.] // Diagn Microbiol Infect Dis. – 2014. – Vol. 78, No. 4. – P. 321–327. – DOI: 10.1016/j.diagmicrobio.2013.08.004.R Core Team. R: a language and environment for statistical computing / R Core Team. – Vienna : R Foundation for Statistical Computing, 2024. – URL: https://www.R-project.org (дата обращения: 05.05.2026).R Core Team. R: a language and environment for statistical computing / R Core Team. – Vienna : R Foundation for Statistical Computing, 2024. – URL: https://www.R-project.org (дата обращения: 05.05.2026).Conway, J. R. UpSetR: an R package for the visualization of intersecting sets and their properties / J. R. Conway, A. Lex, N. Gehlenborg // Bioinformatics. – 2017. – Vol. 33, No. 18. – P. 2938–2940. – DOI: 10.1093/bioinformatics/btx364.Conway, J. R. UpSetR: an R package for the visualization of intersecting sets and their properties / J. R. Conway, A. Lex, N. Gehlenborg // Bioinformatics. – 2017. – Vol. 33, No. 18. – P. 2938–2940. – DOI: 10.1093/bioinformatics/btx364.Changes in microbial composition and interaction patterns of female urogenital tract and rectum in response to HPV infection / Y. H. Dong, Y. H. Luo, C. J. Liu [et al.] // J Transl Med. – 2024. – Vol. 22, No. 1. – P. 125. – DOI: 10.1186/s12967-024-04916-2.Changes in microbial composition and interaction patterns of female urogenital tract and rectum in response to HPV infection / Y. H. Dong, Y. H. Luo, C. J. Liu [et al.] // J Transl Med. – 2024. – Vol. 22, No. 1. – P. 125. – DOI: 10.1186/s12967-024-04916-2.Ворошилина, Е. С. Нормальное состояние микробиоценоза влагалища: оценка с субъективной, экспертной и лабораторной точек зрения / Е. С. Ворошилина, Д. Л. Зорников, Е. Э. Плотко // Вестник Российского государственного медицинского университета. – 2017. – № 2. – С. 42–47.Ворошилина, Е. С. Нормальное состояние микробиоценоза влагалища: оценка с субъективной, экспертной и лабораторной точек зрения / Е. С. Ворошилина, Д. Л. Зорников, Е. Э. Плотко // Вестник Российского государственного медицинского университета. – 2017. – № 2. – С. 42–47.Мелкумян, А. Р. Влагалищные лактобактерии – современные подходы к видовой идентификации и изучению их роли в микробном сообществе / А. Р. Мелкумян, Т. В. Припутневич // Акушерство и гинекология. – 2013. – № 7. – С. 18–23.Мелкумян, А. Р. Влагалищные лактобактерии – современные подходы к видовой идентификации и изучению их роли в микробном сообществе / А. Р. Мелкумян, Т. В. Припутневич // Акушерство и гинекология. – 2013. – № 7. – С. 18–23.Cervicovaginal microbiome factors in clearance of human papillomavirus infection / W. Dai, H. Du, S. Li [et al.] // Front Oncol. – 2021. – Vol. 11. – P. 722639. – DOI: 10.3389/fonc.2021.722639.Cervicovaginal microbiome factors in clearance of human papillomavirus infection / W. Dai, H. Du, S. Li [et al.] // Front Oncol. – 2021. – Vol. 11. – P. 722639. – DOI: 10.3389/fonc.2021.722639.Amabebe, E. The vaginal microenvironment: the physiologic role of Lactobacilli / E. Amabebe, D. O. C. Anumba // Front Med (Lausanne). – 2018. – Vol. 5. – P. 181. – DOI: 10.3389/fmed.2018.00181.Amabebe, E. The vaginal microenvironment: the physiologic role of Lactobacilli / E. Amabebe, D. O. C. Anumba // Front Med (Lausanne). – 2018. – Vol. 5. – P. 181. – DOI: 10.3389/fmed.2018.00181.Lactobacillus iners: friend or foe? / M. I. Petrova, G. Reid, M. Vaneechoutte [et al.] // Trends Microbiol. – 2017. – Vol. 25, No. 3. – P. 182–191. – DOI: 10.1016/j.tim.2016.11.007.Lactobacillus iners: friend or foe? / M. I. Petrova, G. Reid, M. Vaneechoutte [et al.] // Trends Microbiol. – 2017. – Vol. 25, No. 3. – P. 182–191. – DOI: 10.1016/j.tim.2016.11.007.Микробиота влагалища и ВПЧ-ассоциированные заболевания шейки матки: установленная взаимосвязь / Н. М. Назарова, А. С. Акопян, Т. В. Припутневич // Медицинский совет. – 2025. – Т. 19, № 4. – С. 20–28. – DOI: 10.21518/ms2025-084.Микробиота влагалища и ВПЧ-ассоциированные заболевания шейки матки: установленная взаимосвязь / Н. М. Назарова, А. С. Акопян, Т. В. Припутневич // Медицинский совет. – 2025. – Т. 19, № 4. – С. 20–28. – DOI: 10.21518/ms2025-084.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.